1、原理及适用范围
蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)在自然界分布广泛,在各种食品中的检出率也较高,往往是食品在食用前保存温度不当,放置时间过长,使污染在食品中的蜡样芽孢杆菌或残存的芽孢得以生长繁殖,或是由于含有蜡样芽孢杆菌产生的热稳定毒素,而导致食物中毒的发生。中毒的发病率较高,一般为60%~100%。 蜡样芽孢杆菌测试片(FilmplateTM Bacillus cereus BL210)是一种商品化的一次性培养基产品,由选择性培养基、高分子吸水凝胶和专一性酶指示剂等构成,一步培养显色就可确认是否有病原菌的存在,大大地简化了检测程序,对于提高细菌性食物中毒突发事件的反应能力具有重要的作用,同时也可在食品生产企业使用。本产品适用于乳制品、肉类、淀粉类食品、各种甜点等的快速检测。 执行标准:食品卫生微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验(GB/T 4789.14-2003)。
2、操作方法
2.1、样品处理:取样品25mL(g)放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液(或生理盐水)的取样罐或均质杯内,制成1:10的样品匀液。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL,注入含有9mL稀释液的试管内,振摇后成为1:100的样品匀液。
2.2、接种:将蜡样芽孢杆菌测试片(BL210)置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管每个梯度各取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置10s左右,使培养基凝固,每个稀释度接种两片,同时做一片空白对照。
2.3 、培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中,并封口,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。
3、结果判读
对测试片进行观察,呈蓝绿色的菌落为蜡样芽孢杆菌。对于出现阳性菌落的样品,最好用其他方法作进一步的鉴定。
4、附加说明
4.1、本产品具有很好的特异性,接种蜡样芽孢杆菌纯菌株产生典型的蓝绿色点,而大部分非目标菌如大肠杆菌、大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌和阪崎肠杆菌等均被抑制。
4.2、初步试验表明,蜡样芽孢杆菌测试片对纯菌的最低检测限为1cfu/mL。用蜡样芽孢杆菌测试片检测了23种食品样品,同时接种平皿做对比试验。测试片检出阳性样品7个,检出率为30.4%;用平皿法检出阳性样品6个,检出率为26.1%,测试片法比平皿法高了4.3%。
4.3、注意使用过的测试片上带有活菌,需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理 。
5、保存条件
本产品需存放在4℃~10℃冰箱中,保质期为一年,铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好,放到冰箱中,一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水,最好在拆封前将整包回温至室温。