1、原理及适用范围
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种广泛分布于海洋与盐湖中的嗜盐性细菌,海产品中常有此菌,它是引起食源性疾病的主要病原之一,是夏、秋季沿海地区食物中毒和急性腹泻的重要病原。据国家食源性疾病监测网统计,我国近年由副溶血弧菌引起的食物中毒呈显著上升趋势,已成为我国一个严重的食源性公共卫生问题之一。该菌引起的食物中毒临床上表现为:上腹部疼痛、腹泻、恶心、呕吐、发热等,腹泻多为水样便,亦有大便脓血,随后腹部剧烈疼痛,持续1~2天。
副溶血弧菌测试片(FilmplateTM Vibrio parahaemolyticus BH209)是一种商品化的一次性培养基产品,含有高选择性培养基、吸水凝胶和特异酶指示剂等重要成分,培养15~24h就可确认是否有病原菌的存在,大大地简化了检测程序,更加适合卫生监督检验部门和食品生产加工企业使用。 本产品适用于水产品、海产品及其腌、熟制品、水产调味品等的快速检测。参照标准:食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验(GB/T 4789.7-2008)。
2、操作方法
2.1、样品处理:取样品25mL(g)放入含有225mL灭菌3.5%氯化钠水溶液的取样罐或均质杯内,制成1:10的样品匀液。
2.2、接种:将副溶血弧菌测试片(BH209)置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL样品匀液缓慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置10s左右,使培养基凝固。每个样品接种两片,同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒温培养箱内,堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。
3、结果判读
呈紫色的菌落为副溶血弧菌。多数非目的菌在测试片上不生长,少数能生长,如创伤弧菌和霍乱弧菌,但菌落呈蓝色,明显区别于目的菌。出现阳性菌落的样本,最好用其他更为可靠的方法进行验证,没有条件的至少要再取样重复检验一次。
4、报告方式
在25g(或25ml)样品中检出或未检出副溶血性弧菌。
5、附加说明
5.1、根据出入境检验检疫局技术中心所做的对比试验结果表明,副溶血弧菌测试片具有较高的检测灵敏度和准确性,对纯菌的检测灵敏度达到8cfu/mL,与中华人民共和国出入境检验检疫行业标准(SN)方法符合率达到90%以上(中国卫生检验杂志2008,18(12):2621-2623)。
5.2、注意使用过的测试片上带有活菌,需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。
6、保存条件
本产品需存放在4℃~10℃冰箱中,保质期为一年,铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好,放到冰箱中,一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水,最好在拆封前将整包回温至室温。